PCR基因扩增

一、原理
多聚酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR）类似于DNA 的天然复制过程：经过变性、退火、延伸多次循环（图1 ) , DNA 扩增倍数可达2 n 倍。即
Y = ( 1 + X ) n
式中，Y 为DNA 扩增倍数；X 为扩增效率；n 为循环次数
二、材料
（1）模板DNA；PCR 引物；Taq DNA 聚合酶；dNTP ； PCR 缓冲液［20 mmol / L Tris -Hcl 缓冲液（pH 5.3 ) , 1.5 mmol / L MgCl2 , 25 mmol / L Kcl , 100 μg / mL 灭菌明胶或无核酸酶的牛血清白蛋白，0.05 % Tween 20 〕；石蜡油。
（2）乙肝病毒基因的PCR 检测试剂盒。
（3） PCR 扩增仪。
PCR基因扩增
图1 PCR 基本原理示意图
三、方案
1 、经典的PCR 扩增方案
经典的PCR 扩增方案为：
反应总体积 100μL
模板DNA 105 -106 个分子
PCR 引物 20 pmol / L
Taq DNA 聚合酶 2U
dNTP 50 μmol / L
PCR 缓冲液
20 mmol /L Tris-HCI 缓冲液（pH8.3 )
1.5 mmol /L MgC12
25 mmol /L KCl
100μL 灭菌明胶或无核酸酶的牛血清白蛋白
等体积石腊油覆盖。
2、乙肝病毒基因的PCR 检测
1 ） 标本处理