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PCR基因扩增

发布时间: 2016-01-04  点击次数: 577次

一、原理
多聚酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR)类似于DNA 的天然复制过程:经过变性、退火、延伸多次循环(图1 ) , DNA 扩增倍数可达2 n 倍。即
Y = ( 1 + X ) n
式中,Y 为DNA 扩增倍数;X 为扩增效率;n 为循环次数
二、材料
(1)模板DNA;PCR 引物;Taq DNA 聚合酶;dNTP ; PCR 缓冲液[20 mmol / L Tris -Hcl 缓冲液(pH 5.3 ) , 1.5 mmol / L MgCl2 , 25 mmol / L Kcl , 100 μg / mL 灭菌明胶或无核酸酶的牛血清白蛋白,0.05 % Tween 20 〕;石蜡油。
(2)乙肝病毒基因的PCR 检测试剂盒。
(3) PCR 扩增仪。
PCR基因扩增
图1 PCR 基本原理示意图
三、方案
1 、经典的PCR 扩增方案
经典的PCR 扩增方案为:
反应总体积 100μL
模板DNA 105 -106 个分子
PCR 引物 20 pmol / L
Taq DNA 聚合酶 2U
dNTP 50 μmol / L
PCR 缓冲液
20 mmol /L Tris-HCI 缓冲液(pH8.3 )
1.5 mmol /L MgC12
25 mmol /L KCl
100μL 灭菌明胶或无核酸酶的牛血清白蛋白
等体积石腊油覆盖。
2、乙肝病毒基因的PCR 检测
1 ) 标本处理