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重组质粒的筛选

发布时间: 2015-12-21  点击次数: 631次

   

 

 

  

                                                                                                                                          

货号

品牌

包装

库存

单价

Sfk041-0.2ml

Shfeng

0.2ml

现货

询价

 

 

 

 

 

品牌

货号

纯度

包装

库存

价格(RMB)

Shfeng

C0017-100g

≥99%

100g

≥7

170

Shfeng

C0017-500g

≥99%

500g

≥6

740

DR

C12730000

进口标准品带证书      

500mg

≥19

360

 

 

 

 

 

货号

纯度

包装

库存

单价

 A0855-25g

BR

25g

现货

240

  A0855-100g

BR

100g

现货

580

 

 

 

 

 

品牌

货号

纯度

包装

库存

价格

Shfeng

A1932-250mg

GR,98%

250mg

现货

590

Shfeng

A1932-1g

GR,98%

1g

现货

1680

 

 

货号

纯度

包装

库存

单价

   A0156B-100mg

标准品,≥98%

100mg

现货

180

 A0156B-25g

AR,≥98%

25g

现货

60

  A0156B-100g

AR,≥98%

100g

现货

120

  A0156B-500g

AR,≥98%

500g

现货

390

 

 

 

 

 

货号

纯度

包装

库存

单价

B11104-20mg

标准品,≥98%

20mg

3

1700

B11104-1g

标准品,≥98%

1g

1-2

询价

 

 

 

品牌

货号

纯度

包装

库存

价格

Shfeng

A1982-5g

HPLC,99%

5g

现货

79

Shfeng

A1982-25g

HPLC,99%

25g

现货

195

Shfeng

A1982-100g

HPLC,99%

100g

现货

597

 

 

 

 

 

 

货号

纯度

包装

库存

单价

B10519-20mg

标准品,≥98%

20mg

现货

询价

B10519-250mg

标准品,≥98%

250mg

现货

询价

B10519-1g

标准品,≥98%

1g

现货

询价

B10519A-1g

AR,≥95%

1g

现货

580

B10519A-5g

AR,≥95%

5g

现货

1600

 

 

 

 

 

实验仪器 控温摇床 水浴锅 冰箱(-20,70 超净工作台 培养箱 
实验试剂 Amp LB IPTG X-Gal 
平皿 玻棒 三角瓶 离心管 移液器 tip 
实验步骤:20人/班 1平皿/人 
挑取可疑的白色菌落,移植于2mLLB中,250/分摇菌、37培养过。以快速碱法抽提质粒: 
1.取适量菌液于2ml指形管中,12000rpm/min 离心30s-1min 
2.弃上清,且用滤纸吸干。 
3.加溶液I 100μL,重悬菌体(使细菌重新溶解)。振荡。 
溶液I:含葡萄糖,作用形成粘度和渗透压。 
EDTA,作用是能络合Mg+Ca ++,抑制DNA酶活性。 
Tris-HCL,作用作为平衡盐。含溶菌酶,作用是溶解细胞壁。 
4.加溶液II 200μL,反复倒转轻摇。 
溶液II:含NaOH+SDS(现配现用)。作用:使溶液PH值达到12.4左右,使核酸变性,而质粒变性不严重。同时SDS能使蛋白质溶解。 
5.加溶液III 150μL,倒转轻摇匀。 
溶液III:含KACHAC其作用是使溶液PH达到中性,染色体退火形成网状,而质粒还原成螺旋状,溶解在水中。 
6.12000r离心5分钟。 
7.转移上清至另一指形管。 
8.加等体积平衡酚(PH7.6以上,用Tris-NaOH调),猛烈摇匀, 12000r离心5分钟。 
9.小心转移上清至另一指形管。 
10.1/2体积平衡酚和1/2体积氯仿:异丙醇(氯仿:异丙醇为241),混匀,12000r离心5分钟。 
11.重复
12.加等体积氯仿:异丙醇抽提,12000r离心5分钟。 
13.重复
14.1/10体积的3M NaAcPH5.2)和2.5体积的无水乙醇,混匀。冰浴若干时间(时间可长可短)。NaAc使质粒(带负电)电荷减弱,易沉淀。 
15.12000r15分钟。 
16.弃上清,用75%乙醇1ml洗沉淀。作用:去盐。 
17.离心12000r5分钟。 
18.弃上清,风干残留液。 
19.加含有RNase的双蒸水30-50μL,溶解沉淀。 
20.室温作用若干时间,电泳检测或置冰箱结冰层备用。 
结果与分析
根据提取质粒酶切后的电泳图谱, 具体分析是否有插入片段; 有插入片段的为重组子.