士锋生物蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验步骤

一、原理：蛋白质分子在一定的PH条件下，由于基团解离而带有一定的电荷，在含有缓冲液的醋酸纤维薄膜上，受电场作用而以一定的速度向一定的方向移动。不同的蛋白质分子，由于所带的电荷不同，移动的方向或速度不同，从而达到分离。

二、材料与试剂：电泳仪、醋酸纤维薄膜、PH8.6巴比妥缓冲液（称取10.30g巴比妥1.84g，溶于1000ml蒸馏水中，或者称取10.3g巴比妥钠，加1M盐酸8ml，加蒸馏水至1000ml）、染色液（氨基黑10B1g溶于10ml冰醋酸与90ml甲醇的混合液中）、洗涤液（冰醋酸10ml加甲醇90ml，或者甲醇50ml，冰醋酸10ml，加蒸馏水40ml）、透明液（甘油溶液，或用苯甲醇（折光率1.54），水杨酸甲酯（折光率1.54）等溶液）、微量注射器、蛋白质样品液

三、操作方法

1、醋酸纤维薄膜的准备：将醋酸纤维薄膜切成10×2.5cm的膜条，浸于巴比妥缓冲液中约30min，充分浸透至无白点，取出用滤纸吸去多余的缓冲液。

2、点样：用微量注射器将5ul蛋白质样品点在薄膜条中央。

3、电泳：将薄膜条置于电泳仪的支架上，拉直膜条，两端与滤纸条相接，将滤纸浸入到缓冲溶液中，缓冲液两槽应在同一水平面上，加盖密封，平衡10min。接通电源，以10-25V/cm的电场强度电泳0.5-1h。

4、显色：电泳完毕后，取出滤纸条在氨基黑染色液中染色5-10min，然后用漂洗液洗4-5次，直至区带清晰为止。