士锋生物甲醛法测定氨基酸含量

一、原理：氨基酸是两性电解质，不能直接通过酸碱滴定来计算其含量。但在常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH3释放H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此，可用酚酞做指示剂，用标准碱进行滴定。

二、材料与试剂

25ml锥形瓶、3ml微量滴定管、吸管

0.1M标准甘氨酸溶液：准确称取750ml甘氨酸，溶解后定容至100ml

0.1M氢氧化钠、酚酞指示剂（0.5%酚酞的50%乙醇溶液）、中性甲醛溶液（在50ml36%-37%分析纯甲醛溶液中加入1ml0.1%酚酞乙醇水溶液，用0.1M的氢氧化钠溶液滴定到微红，储于密封的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。如已放置一段时间，则使用前需重新中和。

三、操作方法

1、取3个25ml的锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加入2ml0.1M的标准甘氨酸溶液和5ml水混匀。向3号瓶内加7ml水。然后向3个瓶中各加5滴酚酞指示剂，混匀后各加2ml甲醛溶液，再混匀，分别用0.1M标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。

重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的毫升数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。甘氨酸氨基氮回收率=实际测得值/加入理论量×100

公式中实际测得量为滴定*和二号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液的ml数的平均值与三号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液的ml之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008。

2ml乘以标准甘氨酸的摩尔浓度再乘以14.008。即为加入理论量的mg数。

2、取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每ml甘氨酸溶液中含有氨基氮的mg数。

氨基氮（mg/ml）=（V末-V对）×M氢氧化钠×14.008/2

式中：V末为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均值

V对为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均值