细胞内钙测定方法

静息态时[Ca ]i<0.1umol/L。[Ca ]0浓度为1～１.5mmol/L,细胞内外[Ca ]相差104。细胞膜内外的[Ca ]差是细胞外的Ca 进入细胞内的推动力。
(组织细胞以12.5%胰蛋白酶消化20－30 min)
37℃温育10min, 加入Fura-2/AM（终浓度为2-5ug/ml），37℃恒温震荡45 min,负载后细胞以含0.2%牛血清白蛋白的Hank’s液洗2次，用Hank’s液调细胞数为1×106，测定前37℃复温5-10 min。
37℃温育10 min，测荧光（负载Fura-2/AM细胞的荧光比值F）
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加Triton X 100 100μl
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37℃温育5 min
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340nm测荧光（zui大值Fmax）
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20℃水浴5 min
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冰浴 2 min
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加EGTA 80μl（40mM）
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水浴5 min → 冰浴 5 min
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380 nm 测定荧光（zui小值Fmin）