酸性磷酸酶（ACP）的显示实验

目的要求 
1．熟悉酸性磷酸酶显示方法的原理及操作步骤 
2．观察酸性磷酸酶在细胞中的分布

基本原理
酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬细胞，定位于溶酶体内。在溶酶体膜稳定完整时，底物不易渗入，ACP活力微弱或无活性，经固定，在合适pH条件下，膜本身变为不稳定，逐渐改变其渗透性，底物可以渗入，酶活力被显示。

ACP在酸性条件下（pH4.7）可使作用液中的底物β-甘油磷酸钠的磷酸根解离出来，进而与溶液中*结合形成磷酸铅沉淀，因其是难溶解的无色沉淀物，需要与黄色的硫化铵作用，生成棕黑色PBS沉淀而被显示出来。
β-甘油磷酸钠→甘油+PO3-
PO4 +Pb(NO3)2→ Pb2(PO4)2
Pb2(PO4)4 +(NH4)2S→PbS

实验用品
1．器材：注射器、解剖用具、恒温水浴锅、载玻片、盖玻片
2．试剂：
3%淀粉溶液；ACP作用液；2%硫化铵
3．材料：小鼠腹腔液涂片

免疫动物：实验前4～6天用无菌注射器取已灭菌的3%淀粉溶液1ml注射于小鼠腹腔内，每天一次。
酸性磷酸酶（ACP）的显示

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酸性磷酸酶（ACP）的显示

吸取少量腹腔液，在玻片上涂层一薄层，室温晾干。
酸性磷酸酶（ACP）的显示

将涂片滴置于温盒中，滴加适量ACP作用液，37℃作用30分钟。取出后，蒸馏水漂洗。用10%甲醛钙溶液后固定5min。
酸性磷酸酶（ACP）的显示