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神经细胞培养详细介绍

发布时间: 2016-12-05  点击次数: 450次

神经细胞(神经元)不易培养,只有在适宜情况下,如接种在胶原底层上,或加入神经生长因子和胶质细胞因子时,可出现一定程度的分化,长出突起等现象,但很难使之增值。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。 

人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养,不仅能获得生长的胶质细胞,也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来,胶质细胞在培养中生长不稳定,不易自发转化,但对外界因素仍保持很好的敏感性,可用ROUS病毒和SV4等诱发转化。 

一. 设备: 无菌操作设备。 

二. 大型设备CO2培养箱:恒温5%、10%CO2维持培养液中pH值。 

倒置显微镜:用于每天观察贴壁细胞生长情况。 

解剖显微镜,用于准确地取材。 

常温冰箱:-4℃,用于保存各种培养液,解剖液和鼠尾胶。 

低温冰箱:-20℃--80℃,用于储存血清酶,贵重物品和试剂。 

电热干烤箱:用于消毒玻璃器皿。 

高压消毒锅:用于消毒培养皿,手术器械。 

过滤器:配制解剖液、培养液,必须过滤后才可使用,以去除细菌。 

渗透压仪,pH剂,天平等。 

三. 培养器皿及手术器械 

1 培养皿:常用35mm塑料及玻璃皿,解剖取材用15mm-90mm直径。 

2 培养板,24-40孔,可用于开放培养。 

3 培养瓶: 

4 吸管,常用1,5,10ml,均需泡酸、洗涤、灭菌后方可使用。 

5 各类培养液贮存器。 

6 小型手术器械。 

准备: 

一 配制培养液 

(1) 解剖液:以无机盐(去除Ca2+, Mg2+)加葡萄糖配制成PBS缓冲液,保持一定的渗透压和pH值。 

(2) 基础培养基(MEM):主要为多种氨基酸,加入葡萄糖,双蒸馏水溶解。 

(3) 接种培养液:用于胰酶消化后的细胞分散,做成细胞悬液,其成分为MEM含1%谷氨酰胺,另加入10%马血清,当天配制。 

(4) 维持培养液:接种后24h,全部换成此液,后每2周换一次,每次换1/2。其成分为MEM中含5%马血清,1%谷氨酰胺,及适量的支持性营养物质。 

二 培养基质 常用鼠尾胶、小牛皮胶,多聚赖氨酸,再涂胶 

三消毒培养皿的备用。所有培养器皿均需清水冲洗2-3d,达两次ddH2O,每遍洗刷3-4次,加塞包装,置于烤箱中干燥消毒,于培养前1天进行。