蛋白质提取的方法总汇

一、植物组织蛋白质提取方法

1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
　　2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3～4小时）。
　　3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃。
　　4、提取上清夜，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml
　　1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml
　　2、甘油（Glycerol）75ml
　　3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g

这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！

二、植物组织蛋白质提取方法

三氯醋酸-丙酮沉淀法
　　1、在液氮中研磨叶片。
　　2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
　　3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
　　4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
　　5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

药品：
　　提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
　　裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。

这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！

三、组织：肠黏膜

目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达

应用TRIPURE提取蛋白质步骤：
　　含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）
　　倒转混匀，置室温10min
　　离心：12000g，10min，4度，弃上清
　　加入0.3M盐酸胍/95%乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）
　　振荡，置室温20min
　　离心：7500g，5 min，4度，弃上清
　　重复0.3M盐酸胍/95%乙醇步2次
　　沉淀中加入100%乙醇 2ml
　　充分振荡混匀，置室温20min
　　离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀
　　1%SDS溶解沉淀
　　离心：10000g，10min，4度
　　取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）