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蛋白质提取的方法总汇

发布时间: 2015-04-27  点击次数: 548次

一、植物组织蛋白质提取方法

1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。
  2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(34小时)。
  3、用离心机离心8000rpm40min411100rpm20min4
  4、提取上清夜,样品制备完成。

蛋白质提取液:300ml
  11Mtris-HClPH8 45ml
  2、甘油(Glycerol75ml
  3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone6g

这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!

二、植物组织蛋白质提取方法

三氯醋酸-丙酮沉淀法
  1、在液氮中研磨叶片。
  2、加入样品体积3倍的提取液在-20的条件下,然后离心(48000rpm以上1小时)弃上清。
  3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%β-巯基乙醇),摇匀后离心(48000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。
  4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(158000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4待用。
  5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80备用。

药品:
  提取液:含10%TCA0.07%β-巯基乙醇的丙酮
  裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1MDTT65ul/ml

这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!

三、组织:肠黏膜

目的:WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达

应用TRIPURE提取蛋白质步骤:
  含蛋白质上清液中加入异丙醇:(1.5ml1mlTRIPURE用量)
  倒转混匀,置室温10min
  离心:12000g10min4度,弃上清
  加入0.3M盐酸胍/95%乙醇:(2ml1mlTRIPURE用量)
  振荡,置室温20min
  离心:7500g5 min4度,弃上清
  重复0.3M盐酸胍/95%乙醇步2
  沉淀中加入100%乙醇 2ml
  充分振荡混匀,置室温20min
  离心:7500g5min4度,弃上清吹干沉淀
  1%SDS溶解沉淀
  离心:10000g10min4
  取上清-20度保存(或可直接用于WESTERN BLOT