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分离细胞浆和细胞核蛋白全攻略

发布时间: 2014-12-15  点击次数: 1089次

1、用Buffer A 洗涤

2、500G离心5分钟

3、用BufferA+B(2:1)裂解细胞,轻轻混匀,孵育5-10分钟

4、12000G离心10分钟(上清:细胞质。沉淀:细胞核和细胞膜)

5、PBD洗涤细胞两次,12000 G离心10分钟

6、Buffer C裂解细胞膜(放入液氮中快速冷冻,在冰上融化10分钟)

7、12000G离心10分钟(上清:细胞核。沉淀:细胞膜)

8、用PBS洗涤

9、用PRPA Buffer在冰上放置30分钟

10、12000 G离心10分钟(上清:细胞膜)

BufferA:10 mmol/L Hepes 7.5;10 mmol/L kcl;1.5 mmol/L Mgcl2;0.5 mmol/LDTT;1 mmol/LNaF;1 mmol/L glycerol phosphate;1 prptease inhibitor cocktail tablet/50ml

BufferB:BufferA+0.15% of Nonidet P-40;

BufferC:20 mmol/L Hepes 7.5;420 mmol/L Nacl;1.5 mmol/L Mgcl2;0.5 mmol/LDTT;1 mmol/LNaF;1 mmol/L glycerol phosphate;1 prptease inhibitor cocktail tablet/50ml