分离细胞浆和细胞核蛋白全攻略

1、用Buffer A 洗涤

2、500G离心5分钟

3、用BufferA+B（2：1）裂解细胞，轻轻混匀，孵育5-10分钟

4、12000G离心10分钟（上清：细胞质。沉淀：细胞核和细胞膜）

5、PBD洗涤细胞两次，12000 G离心10分钟

6、Buffer C裂解细胞膜（放入液氮中快速冷冻，在冰上融化10分钟）

7、12000G离心10分钟（上清：细胞核。沉淀：细胞膜）

8、用PBS洗涤

9、用PRPA Buffer在冰上放置30分钟

10、12000 G离心10分钟（上清：细胞膜）

BufferA：10 mmol/L Hepes 7.5；10 mmol/L kcl；1.5 mmol/L Mgcl2；0.5 mmol/LDTT；1 mmol/LNaF；1 mmol/L glycerol phosphate；1 prptease inhibitor cocktail tablet/50ml

BufferB：BufferA+0.15% of Nonidet P-40；

BufferC：20 mmol/L Hepes 7.5；420 mmol/L Nacl；1.5 mmol/L Mgcl2；0.5 mmol/LDTT；1 mmol/LNaF；1 mmol/L glycerol phosphate；1 prptease inhibitor cocktail tablet/50ml