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细胞后的注意事项

发布时间: 2014-11-21  点击次数: 746次

1. 收到细胞株包裹时,请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形,若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养,或立即冷冻保存(置于-70 ℃,隔夜后,移到液氮)。

2. 冷冻细胞解冻程序:

2.1. 依据细胞株数据单之基础培养基种类、血清种类和其它之成份和比例, 制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之 血清种类,若因实验需要,必须有所不同时,务必以缓慢比例渐次改变培养基组成, 确定细胞适应后, 方进行所需之实验。

2.2. FBS (fetal bovine serum,胚牛血清),CS (calf serum,小牛血清)和HS (horse serum,马血清),对细胞而言差异极大,请务必依据细胞株资料单之血清种类培养之。

2.3. 将培养基置于37 ℃ 水槽中回温,回温后喷以70 % 酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。取出冷冻管,立即放入37 ℃ 水槽中快速解冻,水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿,否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后,以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部, 移入无菌操作台内。

2.4. 依据细胞种类和浓度,于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液,缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基,混合均匀,放入37 ℃,5 % CO2 培养箱培养。

2.5. 对绝大多数细胞而言,1 % 以下之冷冻保护剂DMSO,不会对细胞之贴附或活 化有不良影响,不需立刻由解冻细胞中去除, 待第二天确定细胞生长或贴附良 好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞,需 立即去除DMSO 者, 则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中,离心300 xg (约1000 rpm),5 分钟,小心移去上清液,加入适量新鲜培养基,将细胞均匀混合后,转移至培养瓶中,再放入37 ℃,5 % CO2 培养箱培养。收到T25 flask 细胞时,处理方式为:

2.5.1. 于寄送过程中,为避免起泡造成细胞脱落死亡,T25 flask 均加满培养基。请检查flask 外观,并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象,若有任何问题, 不要打开盖子,请立即通知细胞实验室。

2.5.2. 将原封之T25 flask 静置于37 ℃,5 % CO2 培养箱中,使细胞回温至37 ℃,并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后,于无菌操作箱内取出flask 内之培养基,(取出之培养基可以再使用),仅留约5-10ml 培养基于flask 内,依一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘, 则将细胞做传代培养。