常用免疫组织化学染色方法

(一)、ABC法：(注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行) 
1.切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。 
2.切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。 
3. *Ⅰ 30秒。 
4. *Ⅱ 30秒。 
5. 95%酒精Ⅰ 30秒。 
6. 95%酒精Ⅱ 30秒。 
7. 90%酒精 30秒。 
8.80%酒精 30秒。 
9. 70%酒精 30秒。 
10.自来水洗。(后面的切片脱蜡至水一般都是1-10) 
11.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。 
12.水洗。 
13.抗原修复。 
14.PBS洗3次，1分钟/次。 
15.加入血清孵育20分钟。 
16.摔干血清，加入一抗60分钟。 
17.PBS洗3次，2分钟/次。 
18.加入二抗孵育30分钟。 
19.PBS洗3次，2分钟/次。 
20.加入ABC复合物，孵育30分钟。 
21. PBS洗3次，2分钟/次。 
22.DAB-H2O2孵育切片5-10分钟。 
23.PBS洗，水洗。 
24.Harris苏木素染核5-10分钟。 
25.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。 
(二)、LSAB法。(SP法)(Labelled streptavidim biotln) 
1.切片脱蜡至水。 
2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。 
3.水洗。 
4.抗原修复。 
5.PBS洗3次，1分钟/次。 
6.加入血清孵育10分钟。 
7.摔去血清，加入一抗孵育30-60分钟。 
8.PBS洗3次，每次2分钟。加入二抗，孵育20分钟。 
9.PBS洗3次，每次2分钟。 
10.加入SP复合物孵育20-30分钟。 
11.PBS洗3次，每次2分钟。 
12.DAB-H2O2孵育5-10分钟。 
13.PBS洗，水洗。 
14.Harris苏木素染核5-10分钟。 
15.水洗，分化 ，蓝化，脱水，透明并封固。