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士锋生物克隆/建库/表达超级感受态细胞介绍

发布时间: 2013-11-06  点击次数: 1158次

Hte 基因型
Hte(转化)基因型是Stratagene开发的特异性提高大质粒、连接DNA的宿主菌基因型,并使细胞生长加快(当天获得菌落),已经成功应用于25kb超螺旋DNA和8kb连接DNA的克隆。XL10-Gold®,BL21-Gold,BL21-CodonPlus®,SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列细胞都带有这个新的性状。

超级感受态细胞
Stratagene提供多种>5 x 109 转化子/μg 超螺旋DNA转化效率的化学法超级感受态细胞正是克隆获得大质粒、连接DNA克隆和建库时zui值得推荐的。

电转化感受态细胞
Stratagene的电转化感受态细胞特别耐受电击处理,方便好用,在DNA材料极珍贵、量少时,或构建有代表性文库时,建议采用电转化感受态细胞。ElectroTen-Blue®细胞是目前商品化的电转化感受态细胞中效率zui高的,达到>3 x 1010 转化子/μg 超螺旋DNA。此外XL1-Blue,XL1-Blue MRF’,SURE®,ABLE® 和TG1等细 胞也提供电转化形式感受态细胞。

SURE®-克隆不稳定DNA
大肠杆菌DNA修复系统会针对重复序列、二级结构(如Z-DNA)等真核DNA进行重排或删除修饰。SURE感受态细胞针对uvrC,umuC,SbcC和RecJ等参与修饰的大肠杆菌基因或蛋白进行突变,提高了真核来源、不规则DNA的稳定性达20倍以上,并且适合克隆甲基化DNA。提供化学和电转化感受态细胞,效率分别达1x1010 和1x109。

ABLE®-克隆毒性DNA
目的DNA的蛋白产物常常对细胞产生毒性,通常的解决办法是采用低拷贝质粒,或者采用极为严紧的表达调控。为了获得稳定的克隆,ABLE细胞减少ColE来源质粒的拷贝数(如pUC、pBluescript系列载体),以达到保持相对较高拷贝数的同时使本底表达对于细胞的毒性降至zui低的效果。

MR系列®-克隆甲基化DNA
真核基因组DNA常常因高度甲基化而被大肠杆菌修饰系统切割、删除,在构建文库时,由于要对cDNA进行甲基化保护,某些cDNA克隆也较难完成。采用Stratagene的MR (Minus Restriction)突变删除了修饰系统的感受态细胞,可以构建质量非常高的cDNA和基因组文库。这些细胞包括:用于大质粒克隆的XL10-Gold®超级感受态细胞,克隆连接DNA、转化效率 目前zui高的ElectroTen-Blue®电转化感受态细胞,单次反应包装的SoloPack® Gold,以及XL2-Blue MRF´ ,XL1-Blue MRF´ Kan(四环素抗性质粒),XL1-Blue MR(没有F´附加体),克隆有二级结构的SURE细胞等。