上海士锋生物科技有限公司给你提供详细的免疫组化实验步骤和注意事项

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*抗体的染色：

1、 将切片浸在3%H2O2甲醇溶液（新鲜配制）中10分钟，PBS冲洗2分钟×3次

2、 加100ul（2滴）血清封闭溶液（试剂1）到切片上，室温孵育10分钟，倒掉（不能冲洗）

3、 加入一抗（按照说明推荐浓度和孵育条件）

4、 使用含有0.05%吐温20的PBS（ TPBS），冲洗2分钟×3次

5、 加入100ul（2滴）生物素化的二抗（试剂2），室温孵育10分钟

6、 使用含有0.05%吐温20的PBS（ TPBS）冲洗2分钟×3次

7、 加入100ul（2滴）链霉亲和素-AP（试剂3）的二抗，室温孵育10分钟

8、 使用含有0.05%吐温20的PBS（ TPBS）冲洗2分钟×3次

9、 准备底物溶液：将1滴试剂4A和4B加入到1ml去离子水中，充分混匀;再加入1滴试剂4C，充分混匀

10、 加100ul（2滴）配好的AP底物溶液，室温孵育（镜下检测孵育时间）

11、 使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应

第二抗体的染色：

12、 加100ul（2滴）双染增强剂（试剂7），孵育

13、 使用含有0.05%吐温20的PBS（ TPBS），冲洗2分钟×3次

14、 加100ul（2滴）血清封闭溶液（试剂1）到切片上，室温孵育10分钟，倒掉（不能冲洗）

15、 加入稀释好的一抗（按照说明推荐浓度和孵育条件）

16、 使用含有0.05%吐温20的PBS（ TPBS），冲洗2分钟×3次

17、 加入100ul（2滴）生物素化的二抗（试剂2），室温孵育10分钟

18、 使用含有0.05%吐温20的PBS（ TPBS）冲洗2分钟×3次

19、 加入100ul（2滴）链霉亲和素-HRP（试剂5）的二抗，室温孵育10分钟

20、 使用含有0.05%吐温20的PBS（ TPBS）冲洗2分钟×3次

21、 准备底物溶液：将1滴试剂6A和6B加入到1ml去离子水中，充分混匀;再加入1滴试剂6C，充分混匀：

22、 加100ul（2滴）配好的HRP底物溶液，室温孵育（镜下检测孵育时间）

23、 使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应

24、 使用复染试剂染色（根据需要选择）

25、 封片剂（试剂8）封片，显微镜观察结果 免疫学免疫组织化学