葡萄糖 -6- 磷酸酶 组织化学 染色法

  葡萄糖-6-磷酸酶 (glucose-6―phosphatase，G-6―P)定位于肝、肾、肠黏膜的微体及内质网内。主要有两方面的生理功能：一方面通过水解葡萄糖-6-磷酸释放葡萄糖来控制葡萄糖释放人血的量；另一方面，在一定条件下通过其磷酸转移酶活性合成葡萄糖-6-磷酸。糖尿病患者血糖浓度增高的同时，伴有葡萄糖-6-磷酸酶 的磷酸转移酶活性增高，其作用是取代肝内的葡萄糖激酶，使葡萄糖转向糖原合成。

    铅法：葡萄糖-6-磷酸水解后所释放出磷酸，为*所捕获，经硫化铵处理，zui终反应产物为颗粒状的硫化铅沉淀。反应通式如下：

葡萄糖―6―磷酸钠+H₂ O 葡萄糖 -6- 磷酸酶 葡萄糖+磷酸 Pb(NO₃ )₂ Pb₃ (PO₄ )₂  (NH₄ )₂ S PbS↓

1)孵育液配制(新鲜配制)

  0．125％葡萄糖―6―磷酸钠                       4ml

  0．2mol/LTris-顺丁烯二酸盐缓冲液(pH 7．4)       4ml

  2％Ph(N0₃ )₂ (2．5％)                              0.6ml

  蒸馏水                                          1．4ml

  充分混合后使用

    2)染色程序：

    ①新鲜组织冰冻切片；

    ②10％福尔马林固定5分钟后水洗；

    ③切片入孵育液中，37℃孵育20分钟水洗；

    ④人1％硫化铵水溶液中1分钟水冲洗；

    ⑤3％福尔马林后固定10分钟；

    ⑥甘油明胶封固。

    3)结果：酶活性处显棕色。

    4)对照实验：①除去底物；②以F―甘油磷酸钠代替底物；③以0．01mol/L氟化钠作为抑制剂。