用51Cr铬酸钠标记靶细胞

一、用51Cr铬酸钠标记靶细胞 
短期标记法 
1．用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的*培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。 
2．如上用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用50ml RPMI-1640培养液悬浮细胞，置37℃水浴30分钟，以减少非特异的自然释放。 
3．离心200×g 10分钟，去上清液。小心用RPMI-1640培养液悬浮细胞，尽量减少振荡引起的细胞损伤以降低靶细胞的自然释放率，将细胞浓度调整为0.5×105或1×105/ml备用。 

二、4小时51Cr释放实验 
1．在96孔圆底细胞培养板中加入51Cr标记的靶细胞，每孔加100μl。 
2．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与靶细胞的比例（效靶比，E：T）根据要求而定，通常为5：1～20：1。阴性对照孔（自然释放）不加效应细胞只加100μl*培养液，阳性对照孔（zui大释放）中加100μ1％NP40（或2％SDS，1mol/L盐酸）。每个实验置三个复孔。 
3．稍稍离心（100×g 3分钟）后，置37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养4小时。 
4．离心培养板200×g 10分钟，每孔吸出100μl上清液置一次性使用的检测管中，在γ－计数仪上（或液闪计数仪上）测定上清液中的每分钟放射性活性（cpm值）。 

3）特异性杀伤活性的计算 
1．用细胞毒性百分比表示：细胞毒性（％）＝