士锋生物磷硫铁法测定血清胆固醇

质，其呈色度与胆固醇含量成正比，可于550nm波长下进行比色测定。正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在l10～220mg/100mL。

三、仪器和试剂

仪器

722分光光度计、台式离心机、具塞锥形瓶等。

试剂

1．1.0mg/mL胆固醇贮存液：将100.0mg胆固醇溶于100mL无水甲醇中。

2.0.02mg/mL胆固醇工作掖：取2mL胆固醇贮存液加98mL无水甲醇。

3.三氯化铁溶液：5.0gFeCl3·6H2O溶于200mL浓磷酸中。

4.磷硫铁试剂(P-S-Fe试剂)：取40mL的三氯化铁溶液用浓硫酸定容到500mL。

四、操作步骤

1.取两支带帽试管，各加入0.1mL血清和10mL无水甲醇，立即用力振荡(或Vortexmixer上混10s)。

2.将两支试管于台式离心机上高速(3000rpnI)离心5min。各取2.0mL上清液转移到相应的锥形瓶

中。

3.取0.02mg/mL胆固醇工作液2.0mL转移到第三个锥形瓶中，用作标准。

4.取2.0mL甲醇加入到第四个锥形瓶中，用做空白。

5.向4个锥形瓶中缓慢加入2.0mL的磷硫铁试剂，轻轻振荡均匀。

6.封住锥形瓶口，置室温30min，所生颜色在1h内稳定。

7.将上述各锥瓶中的有色溶液于550nm下进行比色测定，作记录。.