DNA抽提标准化操作规程

1 目的：DNA抽提标准化操作规范适用于HLA试验中的DNA抽提操作。

2 适用范围：DNA抽提实验室

3 依据： DNA抽提标准化操作规范

4 引用文件：德国BAG公司（以下简称BAG） 《Instructions for use EXTRA-GENE I》

5 程序
5.1试剂准备
5.1.1 BAG® EXTRA-genE I 
该试剂盒包括3部分：Solution 1 、Solution 2、Solution 3
使用前，若Solution 2有沉淀请将其在37℃孵育，直至沉淀*溶解
5.1.2 乙醇溶液，浓度（V/V）为96%或100％
5.1.3 乙醇溶液，浓度（V/V）为70%
5.1.4 灭菌蒸馏水，按照灭菌蒸馏水配制标准操作规范
5.2仪器及用具准备
5.2.1 移液器，规格：20µl – 200µl、200µl – 1000µl
5.2.2 移液器配套吸头，规格：200µl和1000µl，灭菌、无DNA/RNA残留
5.2.3 Eppendorf离心管，规格：1.5mL 或2.0 mL ，灭菌
5.2.4 混匀器
5.2.5 离心机（至少13，000 rpm，）
5.2.6 水浴箱
5.2.7 DNA浓度测定仪（DNA单位为ng/µl，可提供A260/280）
5.2.8 试管架（每排24孔）
5.2.9 手套规格：乳胶手套，与操作者手形相适应，经灭菌

5.3操作步骤：
5.3.1 换工作服、戴手套
5.3.1.1 从工作服衣柜中换取工作服，戴上适应自己手形的乳胶手套。
5.3.2 血样检查
5.3.2.1 血样应在-20℃保存，保存时间不应超过1年，无溶血、血样保存容器无破裂、无渗漏、容器盖子无松动等现象。
5.3.2.2 核对血样记录与捐献者记录，确定血样是否有效，只有有效捐献者记录的血样才能用于试验。
5.3.2.3 血样量至少1 mL。
5.3.2.4 选取满足以上要求的24个血样作为一组抽提标本。
5.3.2.5 若血样本是冻存的，请将血样在室温下孵育至其*解冻。

5.3.3 DNA抽提
5.3.3.1 将选取的24个血样按照编号的顺序依次放置在试管架上，每排12个，共2排。在记录本上按顺序记录样品号、抽提日期、抽提者等。
5.3.3.2 取24个1.5mLEppendorf离心管，依次放置在试管架上，每排12个，共2排，与血样一一对应，并在离心管上用油性记号笔标上对应血样的号码。