:配培养基的时候调PH为7.25,分装-20度保存,几天后解冻再测为7.80,怎么回事啊,难不成每次配时得调到7以下吗?解冻后重新调PH值,再过滤分装,还能用吗?还能-20度保存吗?
答:看来你用的是粉末DMEM,说明书上说应该加3.7 g碳酸氢钠,还说过滤的时候PH值升高0.1-0.2.但是3.7 g碳酸氢钠对应的是10%的CO2培养环境,如果你用的是5%的CO2,那么你只要加入1.85 g碳酸氢钠就行,我试过,这时候基本不用调节PH值,然后开始过滤,过滤的时候PH会上升,但基本上也是在要求的范围。但是即使你只加1.85 g碳酸氢钠,时间太长的话,PH值还是会上升,因为你装配基的瓶子不是密封的,与空气中的CO2有接触,而空气中的CO2得浓度是低于5%的,那么zui时间的延长,碳酸氢钠缓冲对在起作用,PH值又上升了,这是不可避免的。当然可以加入HEPES,引入新的缓冲对,相对来说PH就不容易改变了。
我现在都不测PH值了,目测一下就差不多,只要是那种玫瑰红色就是正常范围,当你对着光发现有紫色的时候,肯定是PH又上升了,如果太紫的话就需要重新调节PH值了。如果仅仅是一般的紫色的话没问题,你可以试试,把培养瓶拿入培养箱中,但一定要把瓶盖拧松,这样几个小时后,你的配基的PH就恢复到正常水平了,因为这时候配基接触到了5%的CO2。