如何检测血浆高密度脂蛋白

高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）是血浆脂蛋白的一种。zui初由肝脏和小肠合成，新分泌至血液中时呈圆盘状，为新生HDL。在循环中或组织间液中经卵磷脂：胆固醇脂酰基转移酶（LCAT）的催化下，与细胞膜及其它脂蛋白相互作用，使新生HDL颗粒表面的胆固醇接受磷脂的脂酰基而生成胆固醇酯。此非极性的胆固醇酯部分进入疏水的核心，使盘状的HDL逐渐转变成球形的成熟的HDL。HDL不仅能与其它脂蛋白相互作用接受其组成成分，而且还能将组织细胞的胆固醇运输到肝脏而代谢。HDL是有蛋白质、磷脂、胆固醇、三酯酰甘油按一定比例组成的。大量的流行病学研究表明，血浆HDL的水平与冠心病的发病率呈负相关，高水平的HDL有利于预防冠心病的发生。 
一定浓度的肝素-Mg2+混合液在一定条件下，可选择性地使血浆中的VLDL及LDL沉淀下来，而HDL仍保留在上清夜中，从而使HDL与VLDL及LDL分开。HDL中含有一定量的胆固醇。利用胆固醇的类脂性质，可用有机溶剂进行抽提，然后取一定量的抽提液蒸干，加入冰醋酸，利用Zak氏三氯化铁显色法使溶解于冰醋酸中的胆固醇在硫酸存在的条件下与高铁离子作用，产生稳定的红色物质。此物质在560nm的波长处有zui大的吸收峰，可作定量分析。 

【器材】 
721分光光度计、离心机、离心管、试管、刻度吸管 

【试剂】 
1．标准胆固醇应用液： 
A.贮存液（1000μg /ml）：准确称取标准胆固醇100mg，溶于100ml 三氯化铁-冰醋酸溶液中。 
B.应用液（40μg /ml）：取贮存液2ml，加三氯化铁-冰醋酸液至100ml。 
2．三氯化铁-冰醋酸液： 
A．贮存液（125mg/ml）：称取三氯化铁12.5g，溶于100ml 冰醋酸中。 
B．应用液（1mg/ml ）：取贮存液2ml，加入冰醋酸至250ml。 
3．浓硫酸（AR）： 
4．丙酮-乙醇混合液（V/V=1：1） 
5．肝素-锰混合液： 
A． 1·06mol/L 氯化锰（MnCl2·4H2O）：称取209.8g MnCl2·4H2O，溶于1000ml水中。 
B．.肝素液（280mg/ml）：称取肝素280mg，溶于10ml氯化锰蒸馏水中。 
C． .肝素--锰混合液：取A液10ml ，B液0. 6ml混匀。临用前配制，至多用一个月。 

【操作步骤】 
HDL的分离： 
1．取干燥的离心管一支，加1.0ml血浆，加肝素--锰混合液0.1ml，混匀后置室温10分钟，3000rpm/min 离心10分钟。沉淀部分为VLDL和LDL，而HDL存在于上清中。 
2．HDL中胆固醇的提取： 
取上清液0.2ml，加丙酮-乙醇混合液5.0ml（快速加入，使沉淀均匀），3000rpm/min 离心5~6分钟，取上清夜2.0 ml于试管A中（作为测定管），置沸水浴中蒸干（沉淀部分为脂蛋白中的蛋白质）。 
3．胆固醇测定；