士锋生物WEALTEC垂直电泳仪的使用方法

本实验的目的是学习WEALTEC垂直电泳仪基本操作流程，确保垂直电泳仪正常运行。主要内容如下：灌胶、染色与脱色注意事项，详细方法如下：

一、 灌胶

1. 把制胶器放在平稳的台面上。

2. 保持制胶器干燥，抬起两侧的羽状开关放开卡门，平放，放进橡胶垫圈并紧扣。先把厚玻璃平板放入，再放两侧的垫片，后放入带凹型的玻璃平板。

3. 紧紧合上卡门，同时按压两侧的羽状开关听到“咔嚓”声音。

4. 倒分离胶：将配好的分离胶溶液用加样枪缓慢加入制胶玻板之间,直至液面达到卡门边框下缘线处。小心用加样枪将去离子水沿水平方向加入制胶板中的分离胶液面上，以防止胶液蒸发并保证胶面平整。聚合大约需要30mins。

5. 倒浓缩胶：分离胶聚合后，倒掉去离子水，用滤纸吸去残液。在玻板中加满浓缩胶溶液，轻轻地插入合适的梳子，梳子的厚面向实验者，避免产生气泡。

30分钟后，除去梳子，抬起两侧的羽状开关放开卡门，拿出带胶的制胶玻板。

6. 安装电泳槽：按压电泳槽中央夹具的开关使卡门松开，将玻璃夹板放入槽内。注意，两玻璃夹板的凹玻板均应与电泳槽内芯接触。如果每次只电泳一块胶，另一套玻璃夹板必须用提供的有机玻璃板代替。

7. 样品处理：在等待浓缩胶聚合时，可对样品进行处理，在样品中按1:1体积比加入上样buffer，在100℃加热3-5分钟以使蛋白质变性。

8. 加样：在外水槽加电泳缓冲液至槽体的一半位置。放正槽体，继续加注缓冲液，避免产生气泡，使内槽的水位均超过凹形板的缺口但低于方形板的上沿。用微量加样器或普通加样枪在梳井内按预定顺序加样，加样量通常为10～25μl。

9. 电泳：盖好上盖，在100—150V的电压下电1—2小时，一般浓缩胶电压80V20~30Min，分离胶120V80Min，到样品指示剂到达玻璃板的下缘，关掉电源。取下玻璃夹板。用刀片或薄板将胶板玻璃橇开，用单面剃刀片将分离胶切掉，将凝胶板的左上角切掉一小角以标记样品顺序。