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大鼠环氧合酶-2(COX-2)elisa试剂盒检测使用说明书

发布时间: 2013-07-15  点击次数: 1480次
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠环氧合酶-2(COX-2)水平。用纯化的-COX-2抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入大鼠环氧合酶-2(COX-2),再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的环氧合酶-2(COX-2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠环氧合酶-2(COX-2)浓度。
试剂盒组成

1
20倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
7
终止液
3ml×1瓶
2
酶标试剂
3ml×1瓶
8
标准品(180U/L)
0.5ml×1瓶
3
酶标包被板
12孔×4条
9
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
4
样品稀释液
3ml×1瓶
10
说明书
1份
5
显色剂A液
3ml×1瓶
11
封板膜
2张 
6
显色剂B液
3ml×1/瓶
12
密封袋
1个

标本要求
1.标本采集后尽早进行实验。血清、血浆可以直接检测
2.组织:按相关文献提取后,取上清液待测
3.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
4.可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
操作步骤
1.         标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为(120 U/L ,80 U/L,40 U/L,20 U/L,10 U/L)。
2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4.         配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.         温育:操作同3。
8.         洗涤:操作同5。
9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
 
计算
  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 严格按说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准
6.底物请避光保存。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
检测范围:
8 UL– 150 U/L
规格:
48人份/盒
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8
2.有效期:6个月