细菌转化实验

1．以pGLO质粒转化大肠杆菌为例，学习转化的基本原理及方法。

2．验证DNA是遗传物质，加深对中心法则的理解。

二．实验原理

转化（transformation）是指一段同源或异源的DNA转入受体细胞并得到表达的水平基因的转移过程，是现代分子生物学研究和基因工程*的重要技术。目前常用的转化方法有CaCl2法(化学转化法)和电转化法。本实验是用pGLO细菌转化试剂盒中提供的pGLO质粒来转化大肠杆菌，所用方法为CaCl2转化法。 
pGLO质粒： 接种环、移液器等

四．实验步骤 

1. 准备平板： 每组：1块LB平板，2块LB/amp平板，1块LB/amp/ara平板 

2. 准备感受态细胞：用250µl无菌水或转化液悬浮试剂盒中提供的大肠杆菌菌粉，此即感受态细胞。 

3. 活化受体细胞：挑取1环E.coli K12 HB101菌液，于LB培养基上37℃活化16-24h。 　 

4. 转化：

1）在两只无菌离心管上分别标 
记+DNA, -DNA。 

2）在上述两管中分别加入 
250µl转化液。 

3) 迅速置于冰上。 

4）各挑取活化好的受体菌的一 
个单菌落，悬浮于两管转化液中。 

5）在标有+DNA的管中加入一 
环质粒DNA，而标有-DNA的管中不加。 

6）将上述两管于冰上放置10min。

7）在准备好的培养基底部如左图。