联会复合体的染色与观察

实 验 目 的

1. 学习光学显微镜下显示联会复合体的实验技术

2. 观察光镜下联会复合体的形态结构

实 验 原 理

联会复合体是减数分裂前期同源染色体配对形成的非*性核内特殊结构，典型的联会复合体由三股平行的线状结构组成，即两条平行侧线和一条纤细的中央轴组成。一般开始于偶线期，成熟于粗线期，消失于双线期。它与减数分裂三个重要环节同源染色体联会、交换以及分离有着密切关系。大量工作表明，联会复合体在真核生物的减数分裂过程中是普遍存在的。

实 验 用 品

一、材料 雄性小白鼠

二、器材

离心机、显微镜、水浴、培养皿、镊子、剪刀、吸管、烧杯、量筒、离心管(10ml)、酒精灯。

三、试剂 (所用试剂均为AR级)

1、0.7%柠檬酸钠(柠檬酸三钠)溶液。

2、3%中性福尔马林(甲醛溶液):甲醛8.3ml，醋酸钠() 1.1g，加蒸馏水91.7ml。

3、50%硝酸银溶液

4、明胶显影液: 称取2g明胶(gelatin)粉末溶解于99ml蒸馏水中，加1ml甲酸。

5、甲醇-冰醋酸

实 验 方 法

脱颈处死动物取睾丸

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放2ml 0.7%柠檬酸钠培养皿中

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释放曲细精管内容物(剪开白膜，用解剖针和小弯镊挟出曲细精管并剪碎，用吸管轻轻吹打)

↓移至刻度离心管中

加8ml 0.7%柠檬酸钠溶液制成细胞悬液

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室温下低渗45~60min

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低渗终止*min，加3%中性甲醛溶液0.3ml，至zui终浓度为0.1%，混匀

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常规离心(1000r/min)

↓弃上清

甲醇和冰醋酸(3:1)混合液固定

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空气干燥法制片(关键是长时间的低渗液处理和添加福尔马林溶液)

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银染

[附] 银染方法

(1)在培养皿底部放一用少量蒸馏水润湿的滤纸，上放2根小玻棒(或竹杆)，置水浴内保温(80℃)。(2)玻片标本细胞面朝上平放其上，加4滴50%硝酸银溶液和2滴明胶显影液，复以盖玻片(或擦镜纸)，直到玻片标本呈金褐色为止，一般为3-4min。(3)移除盖片，并用蒸馏水快速漂洗，晾干。(4)观察或摄影，分析。

实 验 结 果

银染后的联会复合体呈金黄或黄褐色，两条同源染色体联会较紧，但端部仍可见联会复合体结构的双股性。可见Y染色体的大部分和X染色体的一部分局部配对，形成短而清晰的联会复合体。